體積、電導(dǎo)、激光散射法(VCS)
這是Beckman-Coulter公司生產(chǎn)的血細(xì)胞分析儀所采用的經(jīng)典分析方法,它集三種物理學(xué)檢測(cè)技術(shù)于一體,在細(xì)胞處于自然原始的狀態(tài)下對(duì)其進(jìn)行多參數(shù)分析。該方法也稱為體積、電導(dǎo)、激光散射血細(xì)胞分析法。此技術(shù)采用在標(biāo)本中首先加入紅細(xì)胞溶血?jiǎng)┤芙獾艏t細(xì)胞,然后加入穩(wěn)定劑來中和紅細(xì)胞溶解劑的作用,使白細(xì)胞表面、胞漿和細(xì)胞體積保持穩(wěn)定不變。然后應(yīng)用鞘流技術(shù)將細(xì)胞推進(jìn)到流動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)池(Flowcell)中,接受儀器VCS三種技術(shù)的檢測(cè)。
V代表體積(Volume)測(cè)量法,是血液細(xì)胞分析儀檢測(cè)方法采用經(jīng)典的庫爾特專利技術(shù),用低頻電流準(zhǔn)確分析細(xì)胞體積。體積是區(qū)分白細(xì)胞亞群的一個(gè)重要的參數(shù),它可有效區(qū)分體積大小差異顯著的淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞。
C代表高頻電導(dǎo)性(Conductivity),采用高頻電磁探針原理測(cè)量細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)間的差異,也是該公司的專利技術(shù)。細(xì)胞膜對(duì)高頻電流具有傳導(dǎo)性,當(dāng)電流通過細(xì)胞時(shí),細(xì)胞核的化學(xué)組份可使電流的傳導(dǎo)性產(chǎn)生變化,其變化量可以反映出細(xì)胞內(nèi)含物的信息。該參數(shù)可用來區(qū)分體積相近而內(nèi)部性質(zhì)不同的細(xì)胞群體,如淋巴細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞,由于它們的細(xì)胞核特性不同而在傳導(dǎo)性參數(shù)上有所區(qū)別。
S代表激光散射(Scatter)測(cè)量技術(shù),采用氦氖激光源發(fā)出的單色激光掃描每個(gè)細(xì)胞,收集細(xì)胞在10°~70°角度內(nèi)出現(xiàn)的散射光 (MALS)信號(hào)。該激光束可穿透細(xì)胞,探測(cè)細(xì)胞內(nèi)核分葉狀況和胞漿中的顆粒情況,提供有關(guān)細(xì)胞顆粒性的信息,可以區(qū)分出顆粒特性不同的細(xì)胞群體。例如細(xì)胞內(nèi)顆粒粗的要比顆粒細(xì)的散射光更強(qiáng),因此可以用于區(qū)分粒細(xì)胞中的嗜中性、嗜酸性和嗜堿性三種細(xì)胞。
電阻抗、射頻與細(xì)胞化學(xué)聯(lián)合檢測(cè)技術(shù)
典型機(jī)型如SysmexSE-9000/SE-9500/XE-2100等。這類儀器共有四個(gè)不同的檢測(cè)系統(tǒng),將標(biāo)本用特殊細(xì)胞染色技術(shù)處理后再應(yīng)用RF和DC技術(shù)對(duì)白細(xì)胞進(jìn)行分類和計(jì)數(shù)。其共采用如下四個(gè)檢測(cè)系統(tǒng):
嗜酸性粒細(xì)胞檢測(cè)系統(tǒng):該系統(tǒng)是利用電阻抗方式計(jì)數(shù)。血液經(jīng)分血器分血后部分與嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)溶血?jiǎng)┗旌?,特異的溶血?jiǎng)┦故人嵝粤<?xì)胞以外的所有細(xì)胞均溶解或萎縮,這種含完整嗜酸性粒細(xì)胞的液體經(jīng)阻抗電路計(jì)數(shù)。
嗜堿性粒細(xì)胞系統(tǒng):該系統(tǒng)檢測(cè)原理與嗜酸性粒細(xì)胞相同,不同的是其溶血?jiǎng)┲荒鼙A粞褐械氖葔A性粒細(xì)胞。
淋巴、單核、粒細(xì)胞(中性粒細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞)檢測(cè)系統(tǒng):該系統(tǒng)采用電阻抗與射頻聯(lián)合檢測(cè)方式,使用作用較溫和的溶血?jiǎng)瑢?duì)核及細(xì)胞型態(tài)影響不大。在內(nèi)外電極上存在直流和高頻兩個(gè)發(fā)射器。由于直流電不能達(dá)到細(xì)胞質(zhì)及核質(zhì),而射頻電能透入胞內(nèi)測(cè)量核大小和顆粒多少,因此這兩種不同的脈沖信號(hào)的個(gè)數(shù)及高低綜合反映了細(xì)胞數(shù)量、大?。―C)和核及顆粒密度(RF)。由于淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞及粒細(xì)胞的大小、細(xì)胞質(zhì)含量、核形態(tài)與密度均有較大差異,故可通過掃描得出其比例。
幼稚細(xì)胞檢測(cè)系統(tǒng):該系統(tǒng)也是利用電阻抗方式計(jì)數(shù)。其原理血液細(xì)胞分析儀檢測(cè)方法是由于幼稚細(xì)胞上的脂質(zhì)較成熟細(xì)胞少,在細(xì)胞懸液中加入硫化氨基酸后,由于脂質(zhì)占位不同,結(jié)合在幼稚細(xì)胞上的硫化氨基酸較成熟細(xì)胞多,且對(duì)溶血?jiǎng)┯械挚棺饔?,故能保持幼稚?xì)胞的形態(tài)完整而溶解成熟細(xì)胞,即可通過阻抗法檢測(cè)。
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